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| PR-3農(nóng)藥殘留檢測儀 |
來源：鑫安通 【文章字體：大
中 小】 發(fā)布時間：2010/12/7 7:56:29
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PR-3型便攜式農(nóng)藥殘毒快速檢測儀
我國目前農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中使用的化學(xué)農(nóng)藥是有機磷和氨基甲酸酯，此類農(nóng)藥進入人體后可引起神經(jīng)傳導(dǎo)和生理功能紊亂，出現(xiàn)瞳孔縮小、昏迷、抽搐等，最后常因呼吸衰竭而死亡，也會引起致癌和突變作用，尤其對嬰幼兒的危害最大，可導(dǎo)致嬰幼兒尚未發(fā)育成熟的內(nèi)臟器官發(fā)育不全或畸形。酶抑制率法和速測卡法是國家標準規(guī)定的兩種快速檢測的生化方法。本儀器采用了最快速、最簡單的速測卡法。
一、檢測原理
有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥能抑制昆蟲中樞和周圍神經(jīng)系統(tǒng)中特殊的酶——乙酰膽堿酯酶的活性，造成神經(jīng)傳導(dǎo)介質(zhì)乙酰膽堿的積累，影響正常的神經(jīng)傳導(dǎo)。我們正是應(yīng)用了這個原理，從昆蟲中提取乙酰膽堿酯酶與蔬菜瓜果中的殘留農(nóng)藥萃取液進行反應(yīng)，農(nóng)藥殘留量越多，酶的抑制率越高，通過檢測酶被抑制程度，來判斷農(nóng)藥殘留量的情況。
利用速測卡中的膽堿酯酶（白色藥片）可催化靛酚乙酸酯（紅色藥片）水解為乙酸與靛酚。由于有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥對膽堿酯酶的活性有抑制作用，使催化水解后的顯色發(fā)生改變。因此，采用光度法測量顯色的不同，即可判斷樣品中含有機磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥的殘留情況。
二、測量方法及操作
1、 接通電源，儀器開始自檢，達到設(shè)定溫度后，儀器自動提示聲。
2、 將速測卡試紙透明膜揭去，試紙沿中線對折，紅色藥片向上插入試紙，試紙折線置于壓紙筋下方，白色藥片置于加熱器上。
3、 用滴管吸取少量提取液，在試紙白端分別滴上兩滴提取液，每個樣品需要更換一次吸管，或用純凈水洗三次再使用。
4、 按下儀器啟動鍵，開始加熱至TEMP1時，蜂鳴器響一聲和自動進行TIME1倒計時，完成TIME1倒計時后，蜂鳴器響三聲，提示合上前蓋。合上前蓋后，自動進入TIME2倒計時，完成TIME2倒計時后，蜂鳴器連續(xù)發(fā)出“嘩、嘩、嘩”提示開前蓋，并停止加熱。在整個過程中如按啟動鍵中止操作。在整個過程中如按“DISP”鍵可切換時間、溫度顯示。
5、 打開速測儀上蓋，觀察和記錄農(nóng)藥速測卡上白色藥片的顏色變化，藍色為陰性，淺藍色為弱陽性，白色為強陽性。
三、樣品的預(yù)處理
提取液：取表面干凈的果蔬5克，用剪刀剪成1cm大小，放入燒杯中，加入10毫升純凈水，用玻璃棒攪動(每個樣品需要更換一次玻璃棒，或用純凈水洗三次，再使用)菜葉與水充分接觸。每批最好做11個檢樣，同時做一個純凈水的空白對照。每剪成一個樣品，剪刀要洗凈后方可處理另一個樣品，以免互相污染，影響測試結(jié)果。
注意事項
1、 有些蔬菜如生姜、蔥、蒜、木瓜、菠蘿、辣椒、番茄和茶葉等的汁液中含有破壞酶
活性或者使藍色產(chǎn)物褪色的物質(zhì)，處理這類蔬菜時，不要讓其汁液太多釋放出來，不要剪得太碎，浸提時間不宜過長，必要時可采用整枝蔬菜浸提的方法進行測定。
2、 試紙上的提取液不可太多而溢出試紙，亦不可太少而使反應(yīng)不完全。
3、最好將每一批樣品處理好后一起加樣，以免時間過長蒸干。
3、 如有條件，將農(nóng)藥速測卡放在10℃以下保存效果會更好，每小包產(chǎn)品開封后最好在
三天內(nèi)用完，如用不完，可放入將有變色硅膠吸潮劑的瓶中密封保存，如發(fā)現(xiàn)農(nóng)藥速測卡的紅色藥片由鮮紅橙色變?yōu)榘档暮旨t色，說明紙片已吸潮失效。
蔬菜中有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量快速檢測
多年來，蔬菜中農(nóng)藥殘留超標的情況一直較突出，農(nóng)藥中毒事件常有報道。究其原因，一是農(nóng)戶不按規(guī)定的用藥量、次數(shù)、方法或安全間隔期施藥，或施用不允許在蔬菜上使用的劇毒、高毒農(nóng)藥；二是現(xiàn)在標準施行的農(nóng)藥殘留測定需要通過有機溶劑提取、凈化和用大型分析儀器進行，無法對廉價的蔬菜進行隨時隨地或快速的檢測而形成的監(jiān)管不到位。加強對農(nóng)戶的宣傳指導(dǎo)和建立適合我國國情的、規(guī)范化的農(nóng)藥殘留快速檢測方法，是解決問題的關(guān)鍵所在。
目前所使用的農(nóng)藥按其化學(xué)結(jié)構(gòu)大致可分為以下幾類：有機氯類，有機磷類，氨基甲酸酯類，擬除蟲菊酯類等。在我國農(nóng)藥中，70%為有機磷農(nóng)藥，而在我國生產(chǎn)使用的有機磷農(nóng)藥中，70％為劇毒、高毒類，而且較多是禁止在蔬菜作物上使用的。
根據(jù)以上情況，制定出有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥的快速檢測方法，使其不受時間、地點、場合等條件限制，甚至普通消費者也能夠操作使用，有利于及時發(fā)現(xiàn)問題、采取措施，控制高殘留農(nóng)藥蔬菜的攝入，降低農(nóng)藥中毒發(fā)生率，保障消費者食菜安全。
本檢驗方法已經(jīng)國家標準委員會通過，上升為國家標準快速檢驗方GB/T5009.199。
方法一 速測卡法
1范圍
本標準規(guī)定了由酶抑制法測定蔬菜中有機磷和氨基甲酸酯農(nóng)藥殘留量的快速檢驗方法。
本標準適用于蔬菜中有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量的快速篩選測定。
2 原理
膽堿酯酶可催化靛酚乙酸酯（紅色）水解為乙酸與靛酚（藍色），有機磷或氨基甲酸脂類農(nóng)藥對膽堿酯酶有抑制作用，使催化、水解、變色的過程發(fā)生改變，由此可判斷出樣品中是否含有有機磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥的存在。
3 試劑
3.1 固化有膽堿酯酶和靛酚乙酸酯試劑的紙片（速測卡）。
3.2 pH7.5緩沖溶液：分別取15.0g磷酸氫二鈉 [Na2HPO4·12H2O]與1.59g無水磷酸二氫鉀[KH2 PO4 ]，用500mL蒸餾水溶解。
4 儀器
4.1 常量天平 有條件時配備37℃±2℃恒溫裝置
5 分析步驟
5.1整體測定法
5.1.1選取有代表性的蔬菜樣品，擦去表面泥土，剪成1cm左右見方碎片，取5g放入帶蓋瓶中，加入10mL緩沖溶液，震搖50次，靜置2min以上。
5.1.2取一片速測卡，用白色藥片沾取提取液，放置10min以上進行預(yù)反應(yīng)，有條件時在37℃恒溫裝置中放置10min。預(yù)反應(yīng)后的藥片表面必須保持濕潤。
5.1.3將速測卡對折，用手捏3min或用恒溫裝置恒溫3min，使紅色藥片與白色藥片疊合反應(yīng)。
5.1.4每批測定應(yīng)設(shè)一個緩沖液的空白對照卡。
5.2表面測定法（粗篩法）
5.2.1擦去蔬菜表面泥土，滴2~3滴緩沖溶液在蔬菜表面，用另一片蔬菜在滴液處輕輕摩擦。
5.2.2 取一片速測卡，將蔬菜上的液滴滴在白色藥片上。
5.2.3 放置10min以上進行預(yù)反應(yīng)，有條件時在37℃恒溫裝置中放置10min。預(yù)反應(yīng)后的藥片表面必須保持濕潤。
5.2.4 將速測卡對折，用手捏3min或用恒溫裝置恒溫3min，使紅色藥片與白色藥片疊合反應(yīng)。
5.2.5 每批測定應(yīng)設(shè)一個緩沖液的空白對照卡。
6 結(jié)果判定
上面為陽性結(jié)果 下面為陰性結(jié)果
結(jié)果以酶被有機磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥抑制（為陽性）、未抑制（為陰性）表示。 與空白對照卡比較，白色藥片不變色或略有淺藍色均為陽性結(jié)果。白色藥片變?yōu)樘焖{色或與空白對照卡相同，為陰性結(jié)果。 對陽性結(jié)果的樣品，可用其它分析方法進一步確定具體農(nóng)藥品種和含量。
7 附則
7.1速測卡技術(shù)指標
7.1.1 靈敏度指標：速測卡對部分常見農(nóng)藥的檢出限及我國限量標準見表1。
表1 部分常見農(nóng)藥的檢出限（mg/kg）及最大殘留限量（mg/kg）
農(nóng)藥名稱 檢出限 殘留限量 農(nóng)藥名稱 檢出限 殘留限量
甲胺磷 1.7 不得檢出 敵敵畏 0.3 0.2
對硫磷 1.7 不得檢出 敵百蟲 0.3 0.1
水胺硫磷 3.1 不得檢出 樂果 1.3 1.0
馬拉硫磷 2.0 不得檢出 西維因 2.5 2.0
久效磷 2.5 不得檢出 好年冬 1.0 不得檢出
乙酰甲胺磷 3.5 0.2 呋喃丹 0.5 不得檢出
7.1.2 符合率：在檢出的30份以上陽性樣品中，經(jīng)氣相色譜法驗證，陽性結(jié)果的符合率應(yīng)在80%以上。
8 說明
8.1 蔥、蒜、蘿卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇及番茄汁液中，含有對酶有影響的植物次生物質(zhì)，容易產(chǎn)生假陽性。處理這類樣品時，可采取整株（體）蔬菜浸提或采用表面測定法。對一些含葉綠素較高的蔬菜，也可采取整株（體）蔬菜浸提的方法，減少色素的干擾。
8.2 當(dāng)溫度條件低于37°C，酶反應(yīng)的速度隨之放慢，藥片加液后放置反應(yīng)的時間應(yīng)相對延長，延長時間的確定，應(yīng)以空白對照卡用（體溫）手指捏3分鐘時可以變藍，即可往下操作。注意樣品放置的時間應(yīng)與空白對照卡放置的時間一致才有可比性。空白對照卡不變色的原因：一是藥片表面緩沖溶液加的少、預(yù)反應(yīng)后的藥片表面不夠濕潤，二是溫度太低。
方法二 酶抑制率法（分光光度法）
9 原理
在一定條件下，有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥對膽堿酯酶正常功能有抑制作用，其抑制率與農(nóng)藥的濃度呈正相關(guān)。正常情況下，酶催化神經(jīng)傳導(dǎo)代謝產(chǎn)物（乙酰膽堿）水解，其水解產(chǎn)物與顯色劑反應(yīng)，產(chǎn)生黃色物質(zhì)，用分光光度計在412nm處測定吸光度隨時間的變化值，計算出抑制率，通過抑制率可以判斷出樣品中是否有高劑量有機磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥的存在。
10 試劑
10.1 pH8.0緩沖溶液：分別取11.9g無水磷酸氫二鉀與3.2g磷酸二氫鉀，用1000mL蒸餾水溶解。
10.2 顯色劑：分別取160mg二硫代二硝基苯甲酸（DTNB）和15.6mg碳酸氫鈉，用20mL緩沖溶液溶解，4° C冰箱中保存。
10.3 底物：取25.0mg硫代乙酰膽堿，加3.0mL蒸餾水溶解，搖勻后置4℃冰箱中保存?zhèn)溆谩１４嫫诓怀^兩周。
10.4 乙酰膽堿酯酶：根據(jù)酶的活性情況，用緩沖溶液溶解，3 min的吸光度變化D A0值應(yīng)控制在0. 3以上。搖勻后置4℃冰箱中保存?zhèn)溆茫４嫫诓怀^四天。
10.5 可選用由以上試劑制備的試劑盒。乙酰膽堿酯酶的D A0值應(yīng)控制在0. 3以上。
11 儀器
11.1 分光光度計或相應(yīng)測定儀及常量天平。
12 分析步驟
12.1 樣品處理：選取有代表性的蔬菜樣品，沖洗掉表面泥土，剪成1cm左右見方碎片，取樣品1g，放入燒杯或提取瓶中，加入5mL緩沖溶液，振蕩1~2min，倒出提取液，靜置3~5min，待用。
12.2 對照溶液測試： 先于試管中加入2.5mL緩沖溶液，再加入0.lmL酶液、0.1mL顯色劑，搖勻后于37° C放置15min以上（每批樣品的控制時間應(yīng)一致）。加入0.lmL底物搖勻，此時檢液開始顯色反應(yīng)，應(yīng)立即放入儀器比色池中，記錄反應(yīng)3 min的吸光度變化值DA0。
12.3 樣品溶液測試：先于試管中加入2.5mL樣品提取液，其它操作與對照溶液測試相同，記錄反應(yīng)3min的吸光度變化值DAt。
13 結(jié)果的表述計算
13.1 結(jié)果計算
檢測結(jié)果按公式計算：抑制率(%)=[ (DA0-DAt)/ DA0]×100
式中：DA0 棗對照溶液反應(yīng)3min吸光度的變化值； DAt 棗樣品溶液反應(yīng)3min吸光度的變化值；
13.2 結(jié)果判定
結(jié)果以酶被抑制的程度（抑制率）表示。當(dāng)蔬菜樣品提取液對酶的抑制率≥50%時，表示蔬菜中有高劑量有機磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥存在，樣品為陽性結(jié)果。陽性結(jié)果的樣品需要重復(fù)檢驗2次以上。對陽性結(jié)果的樣品，可用其它方法進一步確定具體農(nóng)藥品種和含量。
14 附則
14.1酶抑制率法技術(shù)指標
14.1.1 靈敏度指標：酶抑制率法對部分農(nóng)藥的檢出限見表2酶抑制率法對部分農(nóng)藥的檢出限
農(nóng)藥名稱 檢出限mg/kg 農(nóng)藥名稱 檢出限mg/kg
敵敵畏 0.1 氧化樂果 0.8
對硫磷 1.0 甲基異柳磷 5.0
辛硫磷 0.3 滅多威 0.1
甲胺磷 2.0 丁硫克百威 0.05
馬拉硫磷 4.0 敵百蟲 0.2
樂果 3.0 呋南丹 0.05
14.1.2 符合率：在檢出的抑制率≥50%的30份以上樣品中，經(jīng)氣相色譜法驗證，陽性結(jié)果的符合率應(yīng)在80%以上。
15 說明
15.1 蔥、蒜、蘿卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇及番茄汁液中，含有對酶有影響的植物次生物質(zhì)，容易產(chǎn)生假陽性。處理這類樣品時，可采取整株（體）蔬菜浸提。對一些含葉綠素較高的蔬菜，也可采取整株（體）蔬菜浸提的方法，減少色素的干擾。
15.2 當(dāng)溫度條件低于37° C，酶反應(yīng)的速度隨之放慢，加入酶液和顯色劑后放置反應(yīng)的時間應(yīng)相對延長，延長時間的確定，應(yīng)以膽堿酯酶空白對照測試3min的吸光度變化D A0值在0.3以上，即可往下操作。注意樣品放置時間應(yīng)與空白對照溶液放置時間一致才有可比性。膽堿酯酶空白對照溶液3min的吸光度變化D A0值＜0.3 的原因：一是酶的活性不夠，二是溫度太低。
15.3 當(dāng)吸光度大到無法讀取時，說明測定液渾濁有干擾。
16 方法注釋
16.1 兩種方法的共同點：以上兩種方法的原理、緩沖（提取）溶液pH值、測定中的干擾物質(zhì)和排除方法基本相同。
16.2 速測卡法的檢出限：方法文本中的表1，是由衛(wèi)生部食品衛(wèi)生監(jiān)督檢驗所、廣東省食品衛(wèi)生監(jiān)督檢驗所、北京市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗所、香港政府化驗所、廣東省農(nóng)藥檢定所、深圳市衛(wèi)生防疫站、華南農(nóng)大昆蟲毒理研究室七個單位，使用速測卡法，對我國常見使用的一些有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥檢出限的實驗與驗證數(shù)據(jù)的統(tǒng)計表。從表1可以看出，在使用速測卡法檢出蔬菜樣品為農(nóng)藥陽性時，即可視為有機磷或氨基甲酸酯類的農(nóng)藥已超標。在有條件的單位，可用氣相色譜儀或質(zhì)譜儀對陽性試樣進行進一步的實驗來確定是哪種農(nóng)藥、確切含量。
16.3 酶抑制率法的選擇：在氣相色譜分析儀還未問世及分布較少時，對有機磷類農(nóng)藥的檢測即采取了酶抑制分光光度法，只是由于當(dāng)時酶的純度不夠高、靈敏度較低、酶試劑保存期短、及方法不能區(qū)分出具體的農(nóng)藥而被氣相色譜法所取代。而今用其作為快速分析則恰到好處。只是現(xiàn)在酶試劑的質(zhì)量還應(yīng)進一步提高，有效保存期應(yīng)設(shè)法延長。由于這兩個現(xiàn)實情況，在實驗前，必需測試酶的活性，達到要求后才能往下進行。
16.4 速測卡法操作簡單、使用方便，常溫下試藥的有效期可達一年。酶抑制率光度法與速測卡法比較操作要煩瑣些，夏天時，試藥需要冷藏運輸，但以數(shù)字形式讀取數(shù)據(jù)，較為直觀。
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